促骨方对家兔实验性骨折愈合的影响及镇痛作用讨论论文
软组织损伤，中医称为伤筋，是指人体骨骼周围的皮肤、皮下组织、肌肉、肌健、筋膜、韧带、腱鞘、关节囊等组织的损伤。受伤后，筋肉或损或断，经脉络脉随之受伤，气血互阻，血肿形成，引起疼痛、肿胀和功能障碍。四肢骨折的早期同样存在软组织损伤，瘀血阻滞是其主要的病理机制，故二者均表现为局部肿胀、疼痛、活动受限。促骨方具有活血散瘀、消肿止痛的功效，用于急性软组织损伤及骨折中、早期瘀血阻滞所致的肿胀、疼痛及肢体功效障碍。针对其功能主治，本研究对促骨方促进家兔桡骨骨折模型的'愈合作用进行了药效学研究。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物
普通级新西兰兔，体质量( 2 ±0. 2) kg，雌雄各半，由长沙市东创实验动物科技服务部提供，合格证号: 20101696。SPF 级昆明小鼠，体质量( 20 ± 2) g，雌雄兼用，由长沙市东创实验动物科技服务部提供，合格证号: 20101694。
1. 2 药物与试剂促骨方，由湖南省中医药研究
院中药研究所制剂实验室提供，1 g 浸膏粉相当于4. 67 g 生药( 处方系湖南省中医药研究院李若存研究员的临床经验方: 由三七、丹参、积雪草、槐米组成) 。药材委托湖南省九旺医药有限公司定点采购，经湖南省中医药研究院李若存研究员鉴定，质量符合药典要求。制备工艺: 三七、丹参、槐米用75%乙醇加热回流提取2 次( 5 倍量，4倍量) ，每次提取1. 5 h，滤过，滤液减压回收乙醇，并浓缩至密度为1. 30 ～ 1. 35( 60 ℃) 的清膏，备用; 积雪草加水煎煮2 次( 12 倍水，10 倍水) ，每次1. 5 h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1. 10 ～ 1. 15 ( 60 ℃) 的清膏，加乙醇使含醇量达65%，搅匀，静置24 h，滤过，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1. 30～ 1. 35( 60 ℃) 的清膏，与上述清膏合并，真空干燥( 真空度0. 08 ～ 0. 09 MPa，温度70 ～ 80 ℃) ，粉碎成细粉，临用时取浸膏粉，加适量蒸馏水配制成所需浓度的悬浊液，批号: 20101024。三七伤药胶囊，广西玉林制药有限责任公司，批号: 20120328; 吲哚美辛片，山西太原药业有限公司，批号: 20100801; 硫化钠，上海统亚化工科技发展有限公司，批号: 071220;注射用青霉素，哈药集团制药总厂生产，批号:A101203106; 乌拉坦，国药集团化学试剂有限公司，批号: T20101026。
1. 3 主要仪器
BP1502 型电子天平，瑞士梅特勒-托利多公司; GJ-8402 型热板测定仪，浙江海宁白石电子医药仪器厂。
2 方法
2. 1 促骨方对家兔实验性骨折愈合的影响
2. 1. 1 动物分组、造模及给药: 取新西兰兔60 只，均静脉注射40%乌拉坦2. 5 mL /kg 麻醉后，动物右腿剪毛，用碘酒及酒精消毒，在无菌条件下手术，用骨锯造成家兔右前肢桡骨中段3 mm 完全缺损，术毕缝合伤口，给青霉素5 万单位/只肌注，连续3 d，以预防感染〔1，2〕。随机将家兔分成5 组，即模型组( 蒸馏水) 、三七伤药胶囊( 0. 63 g /kg) 阳性对照组及促骨方低( 1. 428 g /kg ) 、中( 4. 284 g /kg ) 、高( 8. 568 g /kg) 剂量组，每组12 只，灌胃给药，灌胃体积为5. 0 mL /kg，1 次/d，连续30 d。
2. 1. 2 局部皮肤肿胀程度检测: 各组动物于手术前及手术后第1、3、5、7 天用细丝线绕创口正中测量右肢周长作为肿胀程度。
2. 1. 3 X 光检查: 于手术后1、15、30 天，各组取动物拍摄双侧桡骨X 光片，拍摄条件为46 kV，100mA，28 mAs，60 cm。采用柴本甫，过邦辅方法评价，拟定四级骨折愈合标准: Ⅰ级: 骨缺损清晰存在，中间无骨组织影; Ⅱ级: 骨缺损两端有骨质增生影，缺损中间有云雾影样骨组织; Ⅲ级: 缺损中间有明显骨痂组织填充，但仍可见缺损印痕; Ⅳ级: 缺损处已完全被骨组织影填充，缺损印痕难以辨认。以上4 级分别计1、2、3、4 分，计算并比较各组动物的平均积分。
2. 1. 4 光镜组织病理学检查: 各组动物于手术后30 d 评定骨痂组织愈合程度: Ⅰ级: 骨痂部位以纤维性骨痂为主; Ⅱ级: 骨痂具有大量的软骨组织; Ⅲ级: 骨痂部位软骨或骨小梁各约占50%; Ⅳ级: 骨痂部位以交织的骨小梁为主。以上4 级分别计1、2、3、4 分，计算并比较各组动物的平均积分。
2. 2 小鼠热板试验选痛阈值在5 ～ 30 s 的雌性小鼠50 只，按体质量随机分为5 组，即对照组( 蒸馏水20 mL /kg) ，吲哚美辛( 0. 005 g /kg) 阳性对照组及促骨方低( 3. 98 g /kg ) 、中( 11. 94 g /kg ) 、高( 23. 88 g /kg) 剂量组，灌胃给药，体积为20 mL /kg，1次/d，连续7 d。末次给药后30、60、90 min 用热板测痛仪测小鼠痛阈值。
2. 3 小鼠扭体试验取小鼠50 只，按性别体质量随机分为5 组，即对照组( 蒸馏水20 mL /kg) ，吲哚美辛( 0. 005 g /kg) 阳性对照组及促骨方低( 3. 98 g /kg) 、中( 11. 94 g /kg) 、高( 23. 88 g /kg) 剂量组，灌胃给药，体积为20 mL /kg，1 次/d，连续7 d，末次给药后1 h，每鼠腹腔注射0. 6%醋酸0. 2 mL，秒表计时，记录20 min 内小鼠扭体潜伏期及扭体次数。
2. 4 统计学处理计量资料均采用珋x ± s 表示，组间比较采用方差分析，以P < 0. 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 促骨方对家兔实验性骨折愈合的影响
3. 1. 1 促骨方对实验性骨折家兔局部软组织肿胀的影响: 结果如表1 所示，与模型组比较，各给药组在给药后1、3、5 天对家兔骨折部位肿胀度显著低于模型组( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 1. 2 促骨方对实验性骨折家兔损伤部位愈合的影响: 结果如表2 所示，治疗第15 天，促骨方中、高剂量组及三七伤药胶囊组X 光平均积分显著高于模型组( P < 0. 05 或P < 0. 01) ; 治疗第30 天，各给药组X 光平均积分均显著高于模型组( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 1. 3 促骨方对实验性骨折家兔骨痂组织愈合的影响:与模型组比较，促骨方高剂量和阳性药对家兔骨折部位骨痂的形成和骨折的修复有明显的促进作用( P < 0. 01，P < 0. 05) 。而促骨方中、低剂量的作用不明显( P > 0. 05) 。
3. 2 热板法检测促骨方对小鼠痛阈的影响结果如表4 所示，与对照组比较，促骨方中、高剂量组及吲哚美辛组小鼠痛阈在30、60、90 min 时显著升高( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
3. 3 促骨方对醋酸致小鼠扭体反应的影响结果如表5 所示，与对照组比较，各给药组小鼠潜伏期均显著延长( P < 0. 05 或P < 0. 01) ，扭体次数显著减少( P < 0. 05 或P < 0. 01) 。
4 讨论
中医认为，外来暴力猛烈撞击、重物挫压、不慎跌倒、强力扭转均可引起急性伤筋。受伤后，筋肉或损或断，经脉络脉随之受伤，气血互阻，血肿形成，引起疼痛、肿胀和功能障碍。四肢骨折的早期同样存在软组织损伤，瘀血阻滞是其主要的病理机制，故二者均表现为局部肿胀、疼痛、活动受限。治当以活血散瘀，消肿止痛，促进损伤组织愈合为法则。本实验结果表明，连续口服促骨方30 d，对实验性骨折家兔早期局部软组织肿胀有明显的消肿作用，X 光检查和病理检查证明，分别在15、30 d 均能促进家兔骨折部位骨痂的生长和愈合。还能提高热板法致痛小鼠的痛阈，延长醋酸致痛小鼠发生扭体反应的潜伏期及减少小鼠扭体次数，有明显的促进骨折愈合和镇痛作用，为促骨方临床应用提供了实验依据。
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