独子藤中主要药性成分的测试

有关独子藤中主要药性成分的测试

　　仪器与试药

　　仪器

　　Shimadzu LC-10AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-10AT型紫外-可见检测器（日本岛津公司），HW-2000色谱工作站；Millipore溶液过滤器；Millipore 0.45 μm滤膜；AY120电子分析天平（Shimadzu公司）；RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。

　　试药

　　雷公藤红素对照品（自制，经HPLC法测定纯度≥98%）；独子藤于2008年10月采自广东省阳春市，由广东药学院李书渊教授鉴定为独子藤Celastrus monospermus Roxb.;硅胶（柱层析硅胶，青岛海洋化工有限公司）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

　　方法与结果

　　供试品溶液的制备

　　取独子藤药材适量，粉碎过40目筛，精密称取10.0 g，装入100 mL带塞三角瓶中，加入三氯甲烷超声提取3次，每次50 mL，每次30 min。静置，滤取上清液，旋转蒸发仪上浓缩至干。称取4.0 g硅胶装柱（1.5 cm×10 cm），以三氯甲烷1 mL超声溶解样品，上样。先以三氯甲烷50 mL进行洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇（体积比95∶5）100 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，旋转蒸发仪上浓缩至干。残渣用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，0?45 μm微孔滤膜滤过。平行操作5份，作为1~5号供试品溶液。

　　线性关系的考察

　　分别精密吸取“2.2”项下对照品贮备液1、2、3、4、5 mL置于5 mL容量瓶中，分别用甲醇溶解并定容，摇匀，制得系列对照品溶液。依次取上述溶液各20 μL进样，依法测定。以雷公藤红素的峰面积积分值（A）为纵坐标，质量浓度（ρ）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=5.5886×103ρ-2.0127×104（r=0.999 1）。结果表明，雷公藤红素在40~200 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。

　　精密度试验

　　精密吸取同一雷公藤红素对照品溶液20 μL，连续进样6次，测得雷公藤红素的峰面积RSD为1?96%，结果表明仪器精密度良好。取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样，依法测定，结果雷公藤红素峰面积的RSD为2?98%，表明供试品溶液在12 h内稳定。取同一批次的独子藤药材，称取5份，按“2.3”项下方法处理并进样测定，结果雷公藤红素峰面积的RSD为2.59%，表明本方法重复性良好。

　　加样回收率试验

　　取独子藤药材6份，各5 g，精密称定，分别按低、中、高不同质量精密加入雷公藤红素对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表1。雷公藤红素为木栓烷型三萜类化合物，是雷公藤片、雷公藤多苷片等治疗类风湿病制剂的有效成分之一，主要来源于中药雷公藤的根皮，具有抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等多种药理活性[3]。中美科学家于2006年联合发现雷公藤红素的抗癌新机制[4]，引发了雷公藤红素抗癌活性研究的热潮。我们在独子藤的化学成分研究中发现该植物根中富含雷公藤红素，是一种潜在的雷公藤红素植物资源，具有重要开发价值。但至今尚未见有关独子藤中雷公藤红素含量测定的文献报道。本文建立了独子藤中雷公藤红素的含量测定方法，对合理开发独子藤植物资源、促进雷公藤红素的深入研究，均具有重要意义本文方法测得独子藤中雷公藤红素的平均质量分数为0.055 5%，相对较高，提示可将独子藤作为雷公藤红素的药用植物资源加以开发利用，具有重要意义。且雷公藤红素的毒性很大，建立并完善雷公藤红素的含量测定方法，亦有助于安全合理地利用独子藤药材。

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